تأثیر آفلاتوکسین b1 بر رشد سلول های اپیتلیال پستان گاو، و بیان ژن stat5 در شرایط کشت آزمایشگاهی

چکیده امروزه در موارد زیادی دیده شده است که آفلاتوکسین ها به شیر منتقل شده اند. این مواد توسط قارچ های چون aspergilus. flvaus وa. parasiticus تولید می شوند، و از طریق خوراک آلوده وارد دستگاه گوارش و سپس پستان می شوند. با توجه به سمیت این مواد به نظر می رسد که بر رشد سلول های اپیتلیال پستانی تاثیر داشته باشند. یکی از مهمترین ژن های تاثیر گذار بر رشد سلول های اپیتلیال پستان stat5a می باشد که در پاسخ به پرولاکتین بیان می شود، حضور آفلاتوکسینb1 در پستان گاو می تواند بیان این ژن را نیز تحت تاثیر قرار دهد. برای بررسی این موضوع سلول های اپیتلیال بافت پستان گاو در حالت کشت تک لایه و سه بعدی مورد بررسی قرار گرفت. برای این منظور بافت پستان گاو پس از کشتار در اندازه cm2×2 جداه شد و پس از ضد عفونی و شتشوی لازم در کشتارگاه در کنار یخ به آزمایشگاه انتقال داده شد، پس از هضم آنزیمی با کلاژناز، به منظور رسیدن به تعداد سلول مناسب، کشت تک لایه صورت گرفت. رشد سلول ها نشان داد که این سلول ها در حالت کشت سلولی اولیه(primary culture ) رشد خوبی دارند. بعد از رسیدن به تعداد سلول مناسب، سلول ها به 16 چاهک از یک پلیت 24 خانه که به منظور کشت سه بعدی با ماتریژل پوشیده شده بود پاساژ داده شد. با گذشت 21 روز از کشت سه بعدی و رسید به تعداد سلول لازم، سه غلظت 15، 25 و 35 میکرولیتر از آفلاتوکسینb1 (هر کدام با چهار تکرار) به کشت اضافه. بعد از جداسازی سلول های از ماتریژل استخراج rna با استفاده از کیت صورت گرفت و به منظور تعیین کمیت وکیفیت rna نانودراپ انجام شد. همچنین بعد از سنتز cdna توسط کیت به منظور بررسی بیان ژن stat5a و gpdh، real time-pcr صورت گرفت. با گذشت 24 ساعت از اضافه کردن سم بر سلول ها، مشاهده شد در مقایسه با گروه کنترل با افزایش غلظت سم میزان نکروز سلولی بیشتر شد به طوری که کمترین میزان نکروز در تیمار با غلظت 15 میکرولیتر و بیشترین میزان آن در تیمار با غلظت 35 میکرولیتر بود. همچنین مشاهده شد در مقایسه با گروه کنترل با افزایش غلظت سم میزان بیان ژن stat5a نیز کاهش یافت. با توجه به نتایج به دست آمده به نظر می رسد که حضور آفلاتوکسینb1 علاوه بر مضراتی که ممکن است از طریق شیر برای مصرف کننده داشته باشد می تواند به بافت پستان دام نیز آسیب برساند. واژگان کلیدی: ماتریژل ، آفلاتوکسینb1 ، کشت سه بعدی، کشت تک لایه.